Ral BP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402752-ACT

RALBP1 codifica a Ral BP-1 (também conhecida como RLIP76), uma proteína efetora multifuncional das GTPases Ral que integra a sinalização com o tráfego de membranas e a dinâmica do citoesqueleto. A Ral BP-1 participa da endocitose dependente de clatrina, da internalização de receptores e da remodelação de actina por meio de interações com proteínas adaptadoras e vias de pequenas GTPases, conectando a atividade de RalA/RalB à motilidade e a programas celulares responsivos ao estresse. A proteína também tem sido associada a funções de transporte dependentes de ATP e a respostas celulares de desintoxicação, favorecendo a sobrevivência sob estresse oxidativo ou por xenobióticos. A expressão ou sinalização desregulada de RALBP1 está associada a fenótipos de proliferação, invasão e resistência a terapias em múltiplos contextos tumorais, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica e adaptação ao estresse celular.

Ral BP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RALBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ral BP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RALBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RALBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ral BP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RALBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ral BP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ral BP-1 em células tumorais com expressão de RALBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.