Radical Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422659
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Radical Fringe O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Radical Fringe, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Radical Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422659 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rfng codifica a Radical Fringe, uma β1,3-N-acetilglucosaminiltransferase localizada no complexo de Golgi que modifica resíduos de O-fucose em repetições do tipo EGF dos receptores Notch, ajustando assim a intensidade da sinalização de Notch dependente de ligante. Por meio do aumento dependente do contexto das interações com ligantes do tipo Delta em comparação com Jagged/Serrate, a Radical Fringe ajuda a regular decisões de destino celular, formação de fronteiras e padronização tecidual durante o desenvolvimento e em compartimentos de células-tronco/progenitoras no adulto. Alterações na glicosilação mediada por Fringe podem deslocar a saída da via Notch e os programas transcricionais a jusante que controlam proliferação e diferenciação. A desregulação da sinalização de Notch está implicada em diversos processos relevantes para doenças, tornando Rfng um ponto útil para dissecar fenótipos conduzidos por Notch em modelos celulares e in vivo de camundongo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Radical Fringe (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rfng em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rfng, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rfng na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Radical Fringe.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rfng para a investigação da sinalização de Radical Fringe, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rfng críticos para a função Radical Fringe
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rfng para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Radical Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Radical Fringe Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rfng. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Radical Fringe Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Radical Fringe (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rfng para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rfng definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.