Rad52 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401948-ACT

O RAD52 humano codifica a proteína Rad52, um fator de reparo do DNA que promove a recombinação homóloga e o anelamento de fita simples para restaurar a integridade genômica após quebras de dupla fita. A Rad52 participa do reparo associado à replicação e do reinício mediado por recombinação, coordenando-se com a ressecção das extremidades do DNA e com processos dependentes de RAD51 dentro da resposta mais ampla a danos no DNA. Sua atividade influencia a estabilidade cromossômica, os desfechos de recombinação e a sensibilidade celular ao estresse genotóxico. Alterações na função ou na dependência de RAD52 têm sido estudadas no contexto de fenótipos de instabilidade genômica observados em múltiplos cenários de reparo associados ao câncer e em modelos com recombinação homóloga comprometida.

Rad52 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAD52 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rad52 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAD52 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAD52, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rad52. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAD52 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rad52 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rad52 em células tumorais com expressão de RAD52 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.