Plásmido CRISPR de Activación (h) Rad52: sc-401948-ACT

RAD52 humano codifica Rad52, un factor de reparación del ADN que promueve la recombinación homóloga y el apareamiento de cadenas sencillas para restaurar la integridad genómica tras roturas de doble cadena. Rad52 participa en la reparación asociada a la replicación y en el reinicio mediado por recombinación, coordinándose con la resección de los extremos del ADN y con procesos dependientes de RAD51 dentro de la respuesta más amplia al daño del ADN. Su actividad influye en la estabilidad cromosómica, los resultados de recombinación y la sensibilidad celular al estrés genotóxico. La alteración de la función o la dependencia de RAD52 se ha estudiado en el contexto de fenotipos de inestabilidad genómica observados en múltiples contextos de reparación asociados al cáncer y en modelos con recombinación homóloga comprometida.

Rad52 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAD52 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rad52 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAD52 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAD52, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rad52. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAD52 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rad52 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rad52 en células tumorales con expresión de RAD52 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.