Rad51C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403060-ACT

O RAD51C humano codifica a proteína Rad51C, um parálogoo de RAD51 que atua na recombinação homóloga e na rede de resposta a danos no DNA da anemia de Fanconi/BRCA para manter a estabilidade do genoma. A Rad51C contribui para a dinâmica do filamento nucleoproteico de RAD51, para o processamento de junções de Holliday e para o reparo de quebras de dupla fita do DNA que surgem durante o estresse replicativo. Por meio dessas atividades, o RAD51C sustenta a integridade do checkpoint da fase S e evita o acúmulo de aberrações cromossômicas. Alterações na função ou na expressão de RAD51C têm sido associadas a capacidade deficiente de reparo do DNA e a fenótipos de instabilidade genômica estudados na biologia do câncer e em doenças hereditárias de reparo do DNA.

Rad51C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAD51C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rad51C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAD51C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAD51C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rad51C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAD51C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rad51C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rad51C em células tumorais com expressão de RAD51C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.