RACK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400800-ACT

RACK1 humano (receptor for activated C kinase 1; GNB2L1) é uma proteína multifuncional de andaime com repetições WD que integra as saídas de sinalização da proteína quinase C e de outras vias com o controle da tradução associado aos ribossomos. Localiza-se na subunidade ribossomal 40S e coordena a tradução de mRNA, respostas ao estresse e a organização do citoesqueleto, influenciando assim a adesão, migração e proliferação celulares. A RACK1 participa de redes de sinalização ligadas a fatores de crescimento e integrinas, incluindo o crosstalk entre as vias MAPK e PI3K/AKT, e pode modular complexos de quinases e fosfatases em locais subcelulares específicos. A desregulação da expressão ou da sinalização de RACK1 tem sido associada a alterações na sinalização oncogênica, fenótipos metastáticos e remodelamento de vias inflamatórias em múltiplos contextos celulares relevantes para doenças.

RACK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RACK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RACK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RACK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RACK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RACK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RACK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RACK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RACK1 em células tumorais com expressão de RACK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.