Rac 1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-422573-LAC-2

O gene Rac1 de camundongo codifica a pequena GTPase Rac1, um regulador central da dinâmica do citoesqueleto de actina que controla a formação de lamelipódios, a migração celular, a adesão e a polaridade por meio do ciclo entre os estados ligados a GDP e a GTP. A sinalização de Rac1 integra sinais provenientes de receptores tirosina-quinase e de receptores acoplados à proteína G (GPCRs) para coordenar vias como PI3K–AKT, PAK–MAPK e a produção de espécies reativas de oxigênio dependente da NADPH oxidase, modulando proliferação, sobrevivência e funções da imunidade inata. A atividade desregulada de Rac1 está associada a morfogênese tecidual aberrante, respostas inflamatórias e programas de sinalização oncogênica, tornando-a um nó-chave em estudos de invasão de células tumorais, biologia vascular e neurodesenvolvimento. A edição gênica de Rac1 em camundongo permite dissecar mecanisticamente redes de GTPases da família Rho in vivo e em células cultivadas, apoiando ensaios de remodelamento do citoesqueleto, transdução de sinais e transições de estado celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rac 1 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Rac1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rac 1 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Rac1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rac 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Rac1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.