Rac 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400175-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rac 1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Rac 1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Rac 1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para RAC1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rac 1/2/3 Anticorpo (G-2): sc-514583
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rac 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400175-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rac 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400175-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O RAC1 codifica a Rac1, uma pequena GTPase da família Rho que alterna entre os estados ativo (ligado a GTP) e inativo (ligado a GDP) para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a formação de ruffles de membrana e a polaridade celular. A Rac1 sinaliza por meio de efetores como as quinases PAK, o complexo regulador WAVE e a NADPH oxidase, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e de integrinas para regular migração, adesão, endocitose e a geração de espécies reativas de oxigénio. Na biologia humana, a atividade desregulada de RAC1 está ligada a dinâmicas epitélio–mesênquima alteradas, programas de invasão e tráfego de células imunitárias, tendo sido associada à progressão do cancro, a perturbações do neurodesenvolvimento e a fenótipos inflamatórios. Essas ligações de vias tornam o RAC1 um nó amplamente utilizado para investigar o controlo do citoesqueleto, a comunicação cruzada com MAPK e as transições de estado celular em estudos mecanísticos.
Rac 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RAC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RAC1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RAC1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RAC1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.