Rac 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400175-ACT

O RAC1 codifica a pequena GTPase Rac1 da família Rho, um regulador central da dinâmica do citoesqueleto de actina que controla a formação de lamelipódios, a polaridade celular, a renovação das adesões e a migração dirigida. A Rac1 sinaliza por meio de efetores como as quinases PAK e o complexo WAVE/Arp2/3, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e de integrinas para modular a sinalização de MAPK, a geração de espécies reativas de oxigênio e o tráfego endocítico. Por essas vias, o RAC1 influencia a proliferação, a sobrevivência e a função de barreira em muitos tipos celulares. A atividade desregulada de RAC1 é frequentemente estudada no contexto de sinalização oncogênica, motilidade celular associada à metástase, respostas inflamatórias e fenótipos do neurodesenvolvimento nos quais a remodelação do citoesqueleto e a plasticidade sináptica estão alteradas.

Rac 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rac 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rac 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rac 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rac 1 em células tumorais com expressão de RAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.