Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405735

概要

RAB11FIP3は、Rab11ファミリー相互作用タンパク質3（Rab11-FIP3）をコードしており、Rab11のエフェクターとして、細胞質分裂時のリサイクリングエンドソーム機能と膜輸送を協調的に制御します。Rab11-FIP3は、エンドサイトーシス後のリサイクリングや小胞のミッドボディへのターゲティングを誘導し、アブシジョンおよび適切な細胞周期進行を支えるとともに、受容体リサイクリングや極性形成を形作るRAB11依存的な輸送経路とも連携します。リサイクリングエンドソーム動態における役割を通じて、Rab11-FIP3は細胞移動や増殖に影響する過程にも関与するため、がん関連表現型にみられる輸送異常の研究において重要です。さらに、Rab11-FIP3の発現変化や機能の攪乱は、細胞分裂や膜リモデリング経路の欠陥とも関連づけられており、ゲノム安定性に影響を及ぼし得ます。

Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB11FIP3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB11FIP3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB11FIP3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab11-FIP3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab11-FIP3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB11FIP3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab11-FIP3の機能に不可欠なRAB11FIP3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB11FIP3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB11FIP3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab11-FIP3 HDRプラスミド（h）および Rab11-FIP3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB11FIP3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB11FIP3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。