Rab 7L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403366

概要

RAB29はRab 7L1をコードしており、トランスゴルジネットワーク（TGN）およびエンドソームとの接点で重要な役割を担う、小型のRab GTPアーゼです。Rab 7L1は、エフェクタータンパク質との協調的なGTP依存的相互作用を介して、小胞の出芽、カーゴの選別、リサイクリング経路に関与し、リソソーム関連の恒常性やオルガネラの位置決定を形作ります。ヒト細胞においてRAB29は、LRRK2に関連する小胞ダイナミクスやストレス応答性のトラフィッキングを含む経路など、神経細胞および免疫細胞の生物学に関連するプロセスとの関与が示されています。そのため、Rab 7L1機能の攪乱は、神経変性に関連する機序に結び付くと考えられるエンドリソソーム輸送、タンパク質分解回転、ならびにシグナル出力の変化という文脈で研究されています。

Rab 7L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB29遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB29内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB29のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 7L1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 7L1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB29欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 7L1の機能に不可欠なRAB29エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB29ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 7L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 7L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB29遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 7L1 HDRプラスミド（h）および Rab 7L1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB29ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB29標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。