Rab 20 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-412563-LAC

RAB20 codifica a Rab 20, uma pequena GTPase relacionada à Ras que regula o tráfego de membranas, a triagem endocítica e a dinâmica de organelas ao alternar entre os estados ligados a GDP e a GTP. A Rab 20 tem sido associada à maturação de endossomos e a processos relacionados a fagossomos/lisossomos que influenciam a renovação de receptores, o transporte vesicular e as respostas celulares ao estresse e à disponibilidade de nutrientes. Sua atividade se cruza com vias que controlam a troca vesicular e a adaptação metabólica, tornando-a relevante para estudos de inflamação, biologia de infecções e metabolismo celular desregulado. Alterações na expressão de RAB20 foram relatadas em múltiplos programas de expressão associados a doenças, sustentando seu uso como marcador e como nó mecanístico em pesquisas focadas em vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 20 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RAB20 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 20 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RAB20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rab 20. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RAB20 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.