Rab 1A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422550
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rab 1A O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Rab 1A, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rab 1A Anticorpo (G-10): sc-377201
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rab 1A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422550 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rab1a codifica Rab 1A, uma pequena GTPase que regula o tráfego secretor precoce ao coordenar o transporte de vesículas do RE para o Golgi e no interior do Golgi, incluindo eventos de brotamento, ancoragem (tethering) e fusão de vesículas. Ao alternar entre os estados ligados a GTP e a GDP, Rab 1A interage com complexos efetores que influenciam a organização do Golgi, o processamento de proteínas e a entrega de carga, sustentando assim a proteostase e a homeostase das organelas. O tráfego dependente de Rab1a faz interface com vias de autofagia e lisossomais ao controlar o fornecimento de membrana e a maturação de compartimentos. A desregulação do transporte associado a Rab1a tem sido relacionada na literatura a respostas celulares ao stress e a fenótipos relevantes para contextos de neurodegeneração e sinalização oncogénica, tornando-a um nó útil para estudar mecanismos de doença impulsionados pelo tráfego de membranas em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rab 1A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rab1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rab1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rab1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rab 1A.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rab1a para a investigação da sinalização de Rab 1A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rab1a críticos para a função Rab 1A
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rab1a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Rab 1A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Rab 1A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rab1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Rab 1A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Rab 1A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rab1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rab1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.