Rab 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417193

概要

RAB18 は、細胞内膜輸送を制御する Rab ファミリーの低分子 GTPase である Rab18 をコードしており、特に小胞体（ER）と脂質滴の接触界面で重要な役割を担います。Rab18 は GDP 結合型と GTP 結合型の状態を行き来し、膜結合性エフェクターとの相互作用を介して、小胞輸送、オルガネラ間のテザリング、ならびに ER 形態を協調的に制御します。RAB18 依存的な輸送の破綻は、脂質恒常性、分泌経路の動態、オートファジー関連過程に変化をもたらし得ます。遺伝学的・機能的研究により、RAB18 の機能不全が神経発達に関わる表現型や細胞ストレス応答と関連することが示されており、神経疾患の生物学や代謝関連経路のモデルにおける重要性が支持されています。

Rab 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 18タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 18シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 18の機能に不可欠なRAB18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 18 HDRプラスミド（h）および Rab 18 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。