Rab 11B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402256-ACT

RAB11B codifica a pequena GTPase Rab11B, um regulador-chave da dinâmica dos endossomos de reciclagem, que coordena o tráfego de membranas dos endossomos de volta para a membrana plasmática e através da rede trans-Golgi. Ao alternar entre os estados ligados a GDP e a GTP, a Rab11B ajuda a controlar eventos de brotamento, transporte e fusão de vesículas que moldam a reciclagem de receptores, a renovação de integrinas e a entrega polarizada de cargas. A sinalização da família Rab11 interage com a remodelação do citoesqueleto e com programas de migração celular por meio de interações com efetores que influenciam a organização da actina e a composição da membrana. A reciclagem endocítica desregulada e o transporte vesicular associados à atividade de RAB11B foram relacionados a alterações na homeostase de sinalização e a fenótipos relevantes para invasão de células cancerígenas, neurobiologia e mecanismos mais amplos de doenças relacionadas ao tráfego intracelular.

Rab 11B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB11B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 11B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB11B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB11B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 11B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB11B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 11B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 11B em células tumorais com expressão de RAB11B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.