R-Spondin2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402648-ACT

O RSPO2 codifica a R-Spondin2, um agonista secretado da via canônica de sinalização Wnt/β-catenina que amplifica a atividade dos receptores de Wnt por meio de interações com LGR4/5/6 e da modulação da renovação/degradação de receptores mediada por RNF43/ZNRF3. Ao potencializar programas transcricionais dirigidos por Wnt, a R-Spondin2 influencia o padrão embrionário, a diferenciação epitelial e mesenquimal e a homeostase tecidual, com forte relevância para processos como morfogênese, manutenção de células-tronco/progenitoras e renovação de barreiras. A desregulação da sinalização de RSPO2 tem sido associada à ativação aberrante da via em defeitos do desenvolvimento e em contextos oncogênicos, tornando-o um nó útil para dissecar redes regulatórias gênicas dependentes de Wnt. Seu modo de ação extracelular também vincula o RSPO2 a estudos de sinalização parácrina em modelos de organoides, co-culturas e sistemas focados no microambiente.

R-Spondin2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RSPO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

R-Spondin2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RSPO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RSPO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de R-Spondin2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RSPO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de R-Spondin2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via R-Spondin2 em células tumorais com expressão de RSPO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.