quiescin Q6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405059-ACT

O QSOX1 humano codifica a quiescina Q6, uma oxidase de sulfidrila dependente de FAD que catalisa a formação de pontes dissulfeto e contribui para o dobramento oxidativo de proteínas na via secretória e na matriz extracelular. Ao gerar pontes dissulfeto e produzir peróxido de hidrogênio como subproduto, o QSOX1 influencia a homeostase redox, a maturação proteica e processos de remodelamento da matriz que afetam a adesão e a migração celular. A atividade de QSOX1 tem sido associada a mudanças na organização do microambiente tumoral, ao remodelamento fibrótico e a contextos de sinalização inflamatória, tornando-o um ponto útil para o estudo da proteostase extracelular associada a doenças. Sua expressão e função também são relevantes para vias adaptativas ao estresse que coordenam a secreção, o tráfego RE/via secretória e a sinalização dependente de redox.

quiescin Q6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de QSOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

quiescin Q6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus QSOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição QSOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de quiescin Q6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus QSOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de quiescin Q6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via quiescin Q6 em células tumorais com expressão de QSOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.