Qa-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420781-LAC

O gene murino H2-T23 codifica a Qa-1, uma molécula não clássica do MHC de classe I que apresenta um repertório restrito de peptídeos e modula o reconhecimento imunológico ao interagir com receptores inibitórios e ativadores em células NK e em subpopulações de células T CD8. A Qa-1 contribui para a tolerância e a vigilância imunológicas ao moldar respostas citotóxicas e influenciar a dinâmica de apresentação de antígenos no contexto mais amplo da via do MHC de classe I. Alterações na expressão de Qa-1/H2-T23 têm sido associadas a mudanças no tônus inflamatório, evasão imune e regulação de respostas autorreativas, o que a torna relevante para estudos de infecção, imunologia de tumores e fenótipos semelhantes aos autoimunes. Como regulador modelo da apresentação de antígenos, a Qa-1 é frequentemente utilizada para investigar a comunicação cruzada entre células NK e T, a sinalização imune induzida por estresse e mecanismos semelhantes a checkpoints imunológicos em camundongos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Qa-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de H2-T23 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Qa-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição H2-T23, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Qa-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo H2-T23 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.