Pyrin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403193-ACT

MEFV codifica a pirina, uma proteína citosólica de reconhecimento de padrões que regula a sinalização do inflamassoma e a homeostase da imunidade inata em células mieloides humanas. A pirina detecta perturbações associadas a patógenos ou a sinais de perigo que afetam a sinalização de GTPases Rho e a dinâmica do citoesqueleto, coordenando a montagem de complexos de inflamassoma que controlam a atividade da caspase-1 e o processamento subsequente de citocinas da família da IL-1. Por meio dessas vias, a pirina ajuda a ajustar os limiares inflamatórios e as respostas inflamatórias programadas, conectando a vigilância do citoesqueleto às redes de sinalização de NF-κB e de citocinas. A atividade desregulada de MEFV/pirina está geneticamente associada a fenótipos autoinflamatórios, o que a torna um alvo frequentemente estudado em pesquisas sobre sinalização inflamatória e defesa do hospedeiro.

Pyrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MEFV sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pyrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MEFV em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MEFV, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pyrin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MEFV nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pyrin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pyrin em células tumorais com expressão de MEFV silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.