PYGL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430989
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PYGL O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PYGL, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PYGL Anticorpo (C3): sc-517597
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PYGL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430989 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Pygl de camundongo codifica a glicogênio fosforilase hepática (PYGL), uma enzima limitante da velocidade que mobiliza o glicogênio ao catalisar a clivagem fosforolítica para gerar glicose-1-fosfato, que alimenta a glicólise a jusante e a homeostase da glicose. A atividade de PYGL coordena a glicogenólise hepática com sinais hormonais e de detecção de nutrientes, conectando a disponibilidade de carboidratos ao fluxo metabólico através das vias centrais do carbono. A perturbação da função de PYGL altera o armazenamento e a utilização de glicogênio e é relevante para erros inatos do metabolismo do glicogênio, tornando-a um alvo útil para estudar adaptação metabólica e balanço energético em hepatócitos e em modelos de organismo inteiro. Assim, Pygl é amplamente informativo para pesquisas sobre programação metabólica hepática, respostas ao jejum e regulação em nível de sistemas do metabolismo da glicose.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PYGL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pygl em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pygl, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pygl na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PYGL.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pygl para a investigação da sinalização de PYGL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pygl críticos para a função PYGL
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pygl para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PYGL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PYGL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pygl. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PYGL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PYGL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pygl para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pygl definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.