PYGB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406294-ACT

O gene humano **PYGB** codifica a isoforma cerebral da **glicogénio fosforilase**, uma enzima limitante da taxa que catalisa a degradação do glicogénio para gerar **glicose-1-fosfato** e sustentar o fornecimento de energia celular. Ao ligar a mobilização do glicogénio à glicólise e ao metabolismo mais amplo dos hidratos de carbono, o **PYGB** apoia a flexibilidade metabólica durante flutuações na disponibilidade de nutrientes ou de oxigénio. A atividade do **PYGB** cruza-se com redes de sinalização que ajustam a homeostase energética, incluindo a deteção de AMP/ATP e vias responsivas ao stress que influenciam a sobrevivência e a proliferação celulares. Alterações na metabolização do glicogénio e mudanças na expressão de **PYGB** têm sido observadas em contextos de adaptação metabólica e de reprogramação do uso de energia associada ao cancro, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de bioenergética.

PYGB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PYGB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PYGB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PYGB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PYGB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PYGB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PYGB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PYGB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PYGB em células tumorais com expressão de PYGB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.