Ptx3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402766-ACT

PTX3 codifica a pentraxina 3 (Ptx3), uma molécula solúvel de reconhecimento de padrões da família das pentraxinas longas, que atua na imunidade inata e na regulação da matriz extracelular. A Ptx3 é rapidamente induzida por estímulos inflamatórios, como IL-1, TNF e produtos microbianos, e contribui para o controle da ativação do complemento, a opsonização e a modulação do recrutamento de leucócitos em respostas mediadas por NF-κB e por citocinas. Também participa do remodelamento tecidual ao se ligar a componentes da matriz e a fatores de crescimento, conectando a sinalização inflamatória à angiogênese e à organização do estroma. A expressão desregulada de PTX3 está associada a estados inflamatórios crônicos, à biologia das infecções, à inflamação cardiovascular e metabólica e à dinâmica do microambiente associado a tumores, sustentando seu uso como leitura funcional em estudos de imunologia e modelos de doença.

Ptx3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ptx3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ptx3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ptx3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ptx3 em células tumorais com expressão de PTX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.