PTRF Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404669-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PTRFO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PTRF (h) e o Plasmídeo Double Nickase PTRF (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CAVIN1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PTRF Anticorpo (4a): sc-517589
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PTRF Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404669-NIC | 20 µg | $410.00 |
CAVIN1 (PTRF) codifica o fator de liberação da transcriptase e da polimerase I, uma proteína essencial associada às cavéolas que coopera com as caveolinas para promover a biogênese de cavéolas e estabilizar domínios caveolares na membrana plasmática. O PTRF contribui para a organização da membrana, a mecanoproteção e a homeostase lipídica ao regular a endocitose caveolar e a sinalização dependente de cavéolas, influenciando processos como a sinalização do receptor de insulina e as respostas celulares à tensão de membrana. A perda ou disfunção de CAVIN1 perturba a formação de cavéolas e altera o tráfego e a compartimentalização de sinais, afetando a biologia dos adipócitos, a fisiologia muscular e a função de células vasculares. A interrupção genética de CAVIN1 foi associada à lipodistrofia generalizada congênita e a fenótipos relacionados ao músculo, tornando esse locus útil para o estudo da biologia de microdomínios de membrana e da regulação metabólica.
PTRF O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CAVIN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CAVIN1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CAVIN1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CAVIN1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.