PTP1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400732-ACT

PTPN1 codifica a proteína tirosina fosfatase 1B (PTP1B), uma fosfatase não receptora ancorada à face citosólica do retículo endoplasmático que atenua a sinalização ao desfosforilar receptores tirosina quinase ativados e os seus substratos associados. A PTP1B modula as vias dos receptores de insulina e leptina e interseta-se com cascatas acionadas por fatores de crescimento, incluindo MAPK/ERK e PI3K–AKT, moldando programas celulares como a homeostase da glicose, a proliferação e a sobrevivência. Devido ao seu papel no ajuste de redes de sinalização dependentes de fosforilação, alterações na atividade de PTPN1/PTP1B têm sido associadas à desregulação metabólica e a contextos de sinalização oncogénica em que a atividade de recetores e de quinases a jusante é reconfigurada. Estas propriedades tornam o PTPN1 um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização por fosfotirosina, controlo por feedback e comunicação cruzada entre vias em modelos celulares humanos.

PTP1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTP1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTP1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTP1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTP1B em células tumorais com expressão de PTPN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.