PTPζ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401775-ACT

PTPRZ1 codifica a proteína tirosina fosfatase receptora do tipo Z1 (PTPζ), uma fosfatase do tipo receptor enriquecida no sistema nervoso central que modula os estados de fosforilação de tirosina na superfície celular. A PTPζ integra sinais extracelulares de ligantes como a pleiotrofina e a midquina para influenciar a adesão celular, a migração e o crescimento de neuritos, conectando-se a redes de sinalização que incluem quinases da família SRC e as vias MAPK/ERK e PI3K/AKT. Por meio da regulação do comportamento de células gliais e de progenitores neurais, o PTPRZ1 contribui para processos de desenvolvimento e dependentes de atividade no tecido neural. Alterações na expressão ou na sinalização de PTPRZ1 têm sido associadas a estados neuroinflamatórios, patologia desmielinizante e biologia de gliomas, apoiando seu uso em estudos mecanísticos de sinalização neural e interações com o microambiente.

PTPζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRZ1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTPζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRZ1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRZ1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTPζ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRZ1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTPζ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTPζ em células tumorais com expressão de PTPRZ1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.