PTPσCRISPR激活质粒(m): sc-422531-ACT

小鼠 Ptprs 基因编码蛋白酪氨酸磷酸酶 sigma（PTPσ）。PTPσ 是一种受体型磷酸酶，在神经与上皮等组织背景中富集，能够将细胞外基质信号与细胞内去磷酸化事件整合起来，从而调控细胞黏附、神经突起生长、轴突导向以及突触组织。PTPσ 可与硫酸乙酰肝素和硫酸软骨素蛋白聚糖相互作用，把细胞周围基质与细胞骨架重塑及相关信号模块连接起来，进而影响生长锥行为和神经回路可塑性。通过调节依赖磷酸化的通路，Ptprs 参与接触依赖的信号传递与组织模式形成；文献中也将 PTPσ 活性改变与神经发育相关表型、再生能力受损以及细胞—细胞通讯失调联系起来。这些特性使 Ptprs 成为研究由磷酸酶调控的信号机制（尤其是在神经连接性与微环境调节方面）的有用靶点。

PTPσ CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ptprs的表达。

PTPσ CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Ptprs基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Ptprs转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PTPσ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Ptprs位点，并能够研究内源性位点上依赖于PTPσ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ptprs表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PTPσ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。