PTPκ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402287-ACT

PTPRK codifica a proteína tirosina fosfatase receptora do tipo K (PTPκ), uma fosfatase do tipo receptor que modula a sinalização dependente de fosforilação na membrana plasmática e nas junções célula–célula. Ao desfosforilar substratos envolvidos em adesão e na sinalização por fatores de crescimento, a PTPκ contribui para a regulação da integridade epitelial, da inibição por contato e da organização do citoesqueleto. A atividade de PTPRK cruza-se com vias ligadas à dinâmica das junções aderentes e às saídas de receptores tirosina-quinase, influenciando programas de proliferação e migração. Alterações na expressão ou na função de PTPRK têm sido associadas a redes de sinalização desreguladas observadas em diversos contextos de doença, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em estudos de sinalização celular e biologia de junções.

PTPκ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTPκ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTPκ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTPκ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTPκ em células tumorais com expressão de PTPRK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.