PTP IA-2β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404896-ACT

PTPRN2 codifica la proteina di tipo recettoriale “protein tirosina fosfatasi-like” PTP IA-2β (nota anche come IA-2β/phogrin), un membro cataliticamente inattivo della famiglia delle PTP, arricchito sulle membrane dei granuli secretori a nucleo denso nelle cellule neuroendocrine e nelle cellule delle isole pancreatiche. Partecipa al traffico vescicolare regolato e all’esocitosi, influenzando la biogenesi dei granuli secretori, la dinamica di rilascio di ormoni/neuropeptidi e programmi di segnalazione dipendenti dall’attività. PTPRN2 è ampiamente studiato nel contesto degli autoantigeni delle isole e della funzione delle cellule endocrine, con rilevanza per il riconoscimento immunitario e per fenotipi di secrezione disregolata nella ricerca sul diabete. La sua espressione e i suoi ruoli associati ai granuli lo rendono inoltre utile per indagare gli stati di differenziamento neuroendocrino e il rimodellamento della via secretoria.

PTP IA-2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTPRN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PTP IA-2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTPRN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PTP IA-2β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTPRN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PTP IA-2β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PTP IA-2β nelle cellule tumorali con espressione di PTPRN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.