PTN Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422498-ACT

O gene **Ptn** em camundongos codifica a **pleiotrofina (PTN)**, um fator de crescimento secretado que se liga à heparina e sinaliza por meio de **proteoglicanos de sulfato de heparano** e de **fosfatases tirosina de proteína receptoras**, regulando a proliferação, a sobrevivência e a migração celulares, bem como o crescimento de neuritos. A atividade da PTN interage com as vias **MAPK/ERK**, **PI3K/AKT** e de remodelamento do citoesqueleto, que moldam a padronização tecidual e a plasticidade durante o desenvolvimento e o reparo. No sistema nervoso e em microambientes estromais, a alteração da expressão de PTN está associada a mudanças na angiogênese, na inflamação e nas interações com a matriz extracelular que influenciam fenótipos relevantes para doenças. Essas propriedades tornam **Ptn** um alvo útil para estudos mecanísticos de neurodesenvolvimento, respostas a lesão e sinalização do microambiente em modelos murinos.

PTN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ptn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ptn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ptn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ptn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTN em células tumorais com expressão de Ptn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.