PTH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422490
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PTH O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PTH, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PTH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422490 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Pth de camundongo codifica o hormônio da paratireoide (PTH), um peptídeo secretado que mantém o equilíbrio sistêmico de cálcio e fosfato ao sinalizar por meio do receptor PTH1 para regular a remodelação óssea, a reabsorção tubular renal e a excreção de fosfato. A sinalização de GPCR induzida por PTH envolve as vias cAMP/PKA e PLC/PKC e influencia o acoplamento entre osteoblastos e osteoclastos por meio de mediadores downstream, como RANKL e OPG. Em contextos fisiológicos, a expressão de Pth integra o feedback do cálcio circulante e do metabolismo da vitamina D para coordenar a homeostase dos íons minerais. A desregulação da sinalização de PTH é amplamente relevante para pesquisas sobre renovação esquelética, distúrbios do metabolismo mineral e regulação endócrina da comunicação entre rim e osso.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PTH (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pth em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pth, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pth na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PTH.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pth para a investigação da sinalização de PTH, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pth críticos para a função PTH
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pth para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PTH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PTH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pth. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PTH Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PTH (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pth para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pth definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.