PSMD11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410966-ACT

PSMD11 codifica uma subunidade regulatória não ATPase da “tampa” (lid) do proteassoma 26S, que dá suporte à degradação de proteínas dependente de ubiquitina e à proteostase. Ao promover uma montagem eficiente do proteassoma e o processamento de substratos, PSMD11 influencia a renovação (turnover) de reguladores do ciclo celular, fatores de transcrição e proteínas mal dobradas, conectando-se a vias como controle do ciclo celular, respostas ao estresse e processamento de antígenos. Alterações na atividade de subunidades regulatórias do proteassoma têm sido associadas à ruptura da homeostase proteica e a programas de adaptação celular observados em contextos relevantes para câncer e neurodegeneração. Assim, PSMD11 é frequentemente estudado como um modulador da capacidade do proteassoma e da resiliência ao estresse proteotóxico em células humanas.

PSMD11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMD11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSMD11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMD11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMD11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSMD11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMD11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSMD11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSMD11 em células tumorais com expressão de PSMD11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.