PSMD1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-427651-LAC

O gene Psmd1 do camundongo codifica a PSMD1 (Rpn2), uma subunidade essencial não ATPase da partícula reguladora 19S do proteassoma 26S, que atua como suporte estrutural (scaffold) para a montagem e dá apoio ao reconhecimento e ao processamento de substratos durante a proteólise dependente de ubiquitina. Por meio do sistema ubiquitina–proteassoma, a PSMD1 contribui para o controle de qualidade proteica, a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a regulação de vias de sinalização, incluindo a NF-κB, por meio da degradação (turnover) de IκB. A perturbação de componentes regulatórios do proteassoma pode desorganizar a proteostase, alterar programas transcricionais adaptativos ao estresse e influenciar o processamento de antígenos, conectando a biologia de PSMD1 a mecanismos relevantes para neurodegeneração, inflamação e transformação oncogênica. Em modelos murinos, a modulação de Psmd1 oferece uma abordagem viável para estudar a arquitetura regulatória do proteassoma e as consequências a jusante sobre a homeostase celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais PSMD1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Psmd1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PSMD1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Psmd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PSMD1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Psmd1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.