PSMC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405022-ACT

PSMC2 codifica a subunidade regulatória 7 do proteassoma 26S (Rpt1), uma ATPase AAA+ presente na partícula regulatória 19S que fornece energia para o desenovelamento do substrato e sua translocação para o núcleo 20S, onde ocorre a degradação de proteínas dependente de ubiquitina. Ao controlar a proteostase, PSMC2 influencia a progressão do ciclo celular, respostas a dano no DNA, sinalização de estresse e processamento de antígenos, integrando-se a vias como o turnover ubiquitina–proteassoma, a regulação de NF-κB e a adaptação ao estresse proteotóxico. Alterações na atividade do proteassoma e na expressão de subunidades regulatórias são frequentemente associadas a fenótipos proliferativos e ao controle desregulado de checkpoints observados em diversos contextos de doença, tornando PSMC2 um ponto útil para estudar controle de qualidade proteica e remodelamento de redes regulatórias. Assim, perturbar os níveis de PSMC2 pode ajudar a investigar como funções do proteassoma dependentes de ATP moldam programas transcricionais e a aptidão celular.

PSMC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSMC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSMC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSMC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSMC2 em células tumorais com expressão de PSMC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.