PSM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401947

Visão geral

FOLH1 codifica o antígeno de membrana específico da próstata (PSM), uma metaloproteptidase transmembranar do tipo II com atividade de hidrolase de folato e NAALADase, que modula a disponibilidade extracelular de glutamato e o metabolismo do folato. O PSM participa do processamento, dependente de peptidase, de folatos poliglutamados e neuropeptídeos, influenciando a sinalização de aminoácidos e o manejo de nutrientes na superfície celular. Em humanos, a expressão de FOLH1 é amplamente utilizada como marcador molecular na biologia da próstata e também é detectada na neovasculatura associada a tumores, o que a torna relevante para estudos de sinalização de células cancerosas, interações com o microambiente e regulação específica de linhagem. Alterações na atividade e na expressão de PSM têm sido associadas a mudanças metabólicas relacionadas a doenças e ao tráfego mediado por receptores, sustentando investigações mecanísticas em modelos de oncologia e neurobiologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PSM (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FOLH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FOLH1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FOLH1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PSM.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FOLH1 para a investigação da sinalização de PSM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FOLH1 críticos para a função PSM
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FOLH1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PSM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PSM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FOLH1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PSM Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PSM (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FOLH1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FOLH1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.