PSKH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410963-ACT

PSKH1 (proteína quinase de serina H1) é uma proteína quinase de serina/treonina conservada, implicada na regulação da sinalização celular e no controlo, dependente de fosforilação, da função proteica. Tem sido associada a processos como a progressão do ciclo celular e a sinalização responsiva ao stress, através da modulação de redes conduzidas por quinases que coordenam a proliferação e a adaptação. Também é descrito que a PSKH1 humana se localiza em compartimentos nucleares, o que é consistente com funções no controlo de programas de expressão génica e de vias associadas ao processamento de RNA. Sinalização de quinases alterada e cascatas de fosforilação desreguladas são frequentemente observadas em estados celulares relevantes para doença, tornando a PSKH1 um alvo útil para estudos mecanísticos de remodelação de vias em fenótipos complexos.

PSKH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSKH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSKH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSKH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSKH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSKH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSKH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSKH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSKH1 em células tumorais com expressão de PSKH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.