Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PSGL-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401534-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PSGL-1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PSGL-1ダブルニカースプラスミド（h）およびPSGL-1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SELPLGを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PSGL-1 抗体 (KPL1): sc-13535
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PSGL-1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401534-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSGL-1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401534-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SELPLGは、P-セレクチン糖タンパク質リガンド1（PSGL-1）をコードしている。PSGL-1はムチン様でシアル酸化およびフコース化された細胞表面糖タンパク質で、ほとんどの白血球に発現し、P・E・Lセレクチンへの結合を介して活性化内皮上でのテザリング（係留）とローリング（転がり）を仲介する。セレクチン依存的接着における役割を通じて、PSGL-1は白血球のリクルート、血管外遊走（トランスミグレーション）、炎症細胞トラフィッキングの初期段階を統括し、ケモカインシグナル伝達やインテグリン活性化と連動して白血球—内皮間相互作用の安定化に寄与する。PSGL-1は白血球—血小板間のクロストークにも関与し、細胞接触依存的シグナル伝達を調節することで、下流の免疫活性化プログラムに影響を及ぼし得る。PSGL-1—セレクチンの生物学の破綻は、慢性炎症性疾患、血管炎症、血栓形成に伴う白血球リクルート、ならびにがん関連転移といった研究文脈で示唆されており、SELPLGは接着機構と免疫制御のメカニズム研究に有用な標的である。
PSGL-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SELPLG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SELPLG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SELPLGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SELPLGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。