Psf3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406717

概要

GINS3はPsf3をコードしており、Psf3はヘテロ四量体からなるGINS複合体の中核サブユニットです。GINS複合体はCDC45およびMCM2–7ヘリカーゼと協調して、複製起点の発火（origin firing）と連続的なDNA複製に必須のCMG複製ヘリカーゼを形成します。複製フォークの進行を支え、S期チェックポイントシグナルとの協調にも関与することで、Psf3は細胞周期進行中のゲノム安定性の維持に寄与します。GINS複合体活性の撹乱は、複製ストレス、増殖能の変化、DNA損傷応答と関連しており、これらはがん化（腫瘍化）機構の研究でしばしば利用されます。細胞周期に応じて発現が制御される複製因子として、GINS3は、複製ダイナミクス、クロマチンに結合したレプリソームの組み立て、ならびにDNAの完全性を保護する経路を解析するための分子学的な切り口として広く用いられています。

Psf3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGINS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GINS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GINS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Psf3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Psf3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GINS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Psf3の機能に不可欠なGINS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GINS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Psf3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPsf3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GINS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Psf3 HDRプラスミド（h）および Psf3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGINS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGINS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。