PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400448-NIC

O KLK3 codifica o antígeno prostático específico (PSA), uma protease serina secretada da família das calicreínas que contribui para o processamento proteolítico de proteínas do plasma seminal e para a modulação da rede de proteases extracelulares. A atividade do PSA/KLK3 interage com cascatas de clivagem de peptídeos e com processos de remodelação da matriz extracelular que podem influenciar a diferenciação epitelial e as interações estroma–epitélio no microambiente da próstata. A expressão de KLK3 é fortemente regulada pela sinalização do receptor de andrógenos, o que a vincula a programas transcricionais responsivos a hormônios e à biologia da linhagem prostática. A desregulação da expressão de KLK3 e a alteração da atividade proteolítica são amplamente estudadas em contextos de doenças da próstata, incluindo mudanças associadas a tumores na secreção, no estado de diferenciação e na remodelação do microambiente.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KLK3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KLK3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KLK3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KLK3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.