PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400448-ACT

KLK3 codifica o antígeno prostático específico (PSA), uma serino protease secretada relacionada às calicreínas, que participa no processamento proteolítico de proteínas do plasma seminal e na regulação de cascatas extracelulares de proteases. A expressão de PSA/KLK3 é fortemente regulada pela sinalização do receptor de andrógeno e está intimamente ligada à diferenciação do epitélio prostático e à identidade de células luminais. Como componente do remodelamento tecidual e da proteólise adjacente à matriz extracelular, a atividade de KLK3 cruza-se com vias que governam a secreção, o equilíbrio entre ativação/inibição de proteases e a dinâmica do microambiente. A transcrição desregulada de KLK3 é amplamente utilizada como um indicador molecular de programas responsivos a andrógenos e da fisiopatologia prostática em modelos experimentais.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen em células tumorais com expressão de KLK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.