pS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402867-ACT

TFF1 codifica o fator trefoil secretado pS2, um pequeno peptídeo associado a mucinas que auxilia na manutenção da barreira epitelial, na restituição após lesão e na modulação da inflamação mucosa. O pS2 participa de processos ligados à migração celular, às interações célula–célula e à proteção contra estresse por proteases e por ácido, com expressão regulada por programas transcricionais responsivos a hormônios. Em tecidos humanos, o TFF1 é amplamente estudado no epitélio gastrointestinal e mamário, onde padrões de expressão alterados estão associados ao estado de diferenciação epitelial e à desregulação de sinalização proliferativa. Essas propriedades fazem de TFF1/pS2 um útil marcador molecular para vias que governam a homeostase da mucosa, o remodelamento epitelial e a regulação transcricional relevante para o câncer.

pS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TFF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

pS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TFF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TFF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de pS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TFF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de pS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via pS2 em células tumorais com expressão de TFF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.