PRX V Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424925-ACT

Prdx5 de camundongo codifica a peroxirredoxina V (PRX V), uma peroxirredoxina atípica de 2-Cys que reduz peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos orgânicos, ajudando a manter a homeostase redox celular. A PRX V sustenta a defesa antioxidante em múltiplos compartimentos subcelulares e modula a sinalização dependente de peróxidos, influenciando a função mitocondrial, respostas imunes inatas e a apoptose. Ao moldar o fluxo de espécies reativas de oxigênio, a PRX V se integra a vias reguladas por redox que controlam metabolismo, adaptação ao estresse e sinalização inflamatória. Alterações na atividade de PRDX5/PRX V têm sido associadas a fenótipos de estresse oxidativo relevantes para modelos de neurodegeneração, disfunção metabólica e lesão inflamatória, tornando-a útil para estudos mecanísticos de biologia redox.

PRX V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prdx5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prdx5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prdx5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX V. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prdx5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX V no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX V em células tumorais com expressão de Prdx5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.