PrP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401061-ACT

PRNP codifica a proteína priônica celular (PrP), uma glicoproteína de membrana ancorada por glicosilfosfatidilinositol, enriquecida na superfície neuronal e em balsas lipídicas. A PrP participa da proteostase e de processos de sinalização associados à membrana, incluindo o tráfego endocítico, a homeostase redox e a modulação da função sináptica por meio de interações com componentes da matriz extracelular e parceiros de adesão celular. O mau dobramento da PrP em conformações resistentes à protease está na base das encefalopatias espongiformes transmissíveis e está ligado à neurodegeneração caracterizada por agregação proteica, respostas alteradas ao estresse celular e disfunção neuronal progressiva. Assim, a regulação de PRNP é relevante para o estudo de vias que governam o controle de qualidade do dobramento proteico, a sinalização neuroinflamatória e mecanismos de sobrevivência neuronal.

PrP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRNP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PrP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRNP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRNP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PrP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRNP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PrP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PrP em células tumorais com expressão de PRNP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.