Prothrombin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400962-NIC

F2 codifica a protrombina humana, um zimogénio dependente de vitamina K que é convertido proteoliticamente em trombina para conduzir as etapas centrais da cascata de coagulação. A trombina cliva o fibrinogénio em fibrina, amplifica a formação do coágulo através da ativação dos fatores V, VIII, XI e XIII, e sinaliza por meio de recetores ativados por proteases para coordenar a ativação plaquetária e respostas inflamatórias vasculares. A produção e a maturação da protrombina dependem do processamento secretório hepático e da γ-carboxilação, ligando a regulação de F2 ao estado nutricional e ao controlo de qualidade do retículo endoplasmático. A atividade desregulada de F2 e a variação genética são amplamente estudadas no contexto de trombose e desequilíbrio hemostático, oferecendo um ponto de entrada mecanístico para dissecar a dinâmica da via de coagulação em modelos celulares e in vivo.

Prothrombin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus F2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de F2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função F2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com F2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.