PRMT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405107-ACT

PRMT2 (protein arginine methyltransferase 2) é uma enzima humana dependente de SAM que catalisa a metilação de arginina em substratos histônicos e não histônicos, moldando a acessibilidade da cromatina e a produção transcricional. Por meio da modulação de interações proteína–proteína e da sinalização epigenética, a PRMT2 influencia processos que incluem regulação transcricional, processamento de RNA e controle do ciclo celular. A atividade da PRMT2 se cruza com programas transcricionais de receptores nucleares e inflamatórios, vinculando sua regulação a vias que governam a diferenciação celular e respostas ao estresse. Alterações na expressão de PRMT2 ou na sinalização dependente de metilação têm sido associadas a estados de expressão gênica desregulados observados em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu estudo em pesquisas mecanicistas e focadas em vias.

PRMT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRMT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRMT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRMT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRMT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRMT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRMT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRMT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRMT2 em células tumorais com expressão de PRMT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.