PRMT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402249-ACT

PRMT1 (metiltransferase de arginina proteica 1) é a principal PRMT do tipo I em células humanas, catalisando a dimetilação assimétrica de resíduos de arginina em histonas e em numerosos substratos não histônicos. Por meio dessas modificações pós-traducionais, a PRMT1 regula a acessibilidade da cromatina, programas transcricionais, processamento de RNA, respostas a danos no DNA e transdução de sinais, com conexões notáveis com os outputs das vias MAPK/ERK e PI3K/AKT por meio de interações proteicas dependentes de metilação. A atividade da PRMT1 molda a progressão do ciclo celular, estados de diferenciação e adaptação ao estresse ao coordenar o controle epigenético e pós-transcricional. A expressão desregulada de PRMT1 ou padrões de metilação de seus substratos é frequentemente estudada em biologia do câncer, sinalização imune e neurobiologia como correlatos moleculares de alterações na expressão gênica e na função do proteoma.

PRMT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRMT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRMT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRMT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRMT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRMT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRMT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRMT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRMT1 em células tumorais com expressão de PRMT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.