PRL-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422418-ACT

O gene Prlr de camundongo codifica o receptor de prolactina (PRL-R), um membro da superfamília de receptores de citocinas que transduz sinais de prolactina para regular o desenvolvimento da glândula mamária, a lactação, a fertilidade, a homeostase metabólica e a modulação imune. Após a ligação do ligante, o PRL-R ativa a sinalização JAK2/STAT5 e também aciona as vias PI3K/AKT e MAPK para controlar programas transcricionais que governam a diferenciação celular, a sobrevivência e a responsividade endócrina. Alterações na atividade do PRLR têm sido associadas a fenótipos reprodutivos e metabólicos desregulados e a contextos de sinalização proliferativa relevantes para a biologia mamária e a inflamação. Como um nó que integra sinais endócrinos a redes transcricionais a jusante, o PRL-R é frequentemente investigado em estudos de crosstalk hormonal e de regulação gênica específica de tecido.

PRL-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prlr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRL-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prlr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prlr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRL-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prlr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRL-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRL-R em células tumorais com expressão de Prlr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.