Prickle4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-412059-LAC

PRICKLE4 codifica a proteína Prickle4, um regulador conservado da sinalização de polaridade celular planar (PCP) que ajuda a coordenar comportamentos celulares direcionais ao modular a atividade da via Wnt/PCP não canônica. Por meio de interações com componentes centrais da PCP e reguladores citosqueléticos a jusante, a Prickle4 pode influenciar a polaridade, a adesão e a motilidade celulares — processos relevantes para a organização tecidual e a morfogênese. Alterações na sinalização PCP estão implicadas em anomalias do desenvolvimento e em fenótipos associados ao câncer, como migração e invasão aberrantes, tornando o PRICKLE4 um ponto útil para estudos mecanísticos de vias. Em modelos celulares humanos, investigar a expressão de PRICKLE4 e programas transcricionais a jusante pode esclarecer como sinais de PCP se integram à dinâmica de pequenas GTPases e do citoesqueleto.

As Partículas de Ativação Lentivirais Prickle4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRICKLE4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Prickle4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRICKLE4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Prickle4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRICKLE4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.