Plásmido CRISPR de Activación (h) Presenilin 2: sc-403532-ACT

PSEN2 codifica la presenilina 2, un componente catalítico del complejo γ-secretasa que media la proteólisis intramembrana de múltiples proteínas de membrana de tipo I, incluidas APP y los receptores Notch. A través de la actividad de la γ-secretasa, la presenilina 2 contribuye a la señalización de Notch, a la proteólisis intramembrana regulada y a programas transcripcionales posteriores que controlan decisiones sobre el destino celular. PSEN2 también se vincula con la biología endolisosomal y mitocondrial, la homeostasis del calcio y el tráfico de membranas, procesos que influyen en la función neuronal y en las respuestas al estrés. La variación genética y la alteración de la función de la presenilina 2 se asocian con fenotipos neurodegenerativos, en particular con vías relacionadas con la enfermedad de Alzheimer que implican el procesamiento amiloidogénico de APP y la integridad sináptica.

Presenilin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSEN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Presenilin 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSEN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSEN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Presenilin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSEN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Presenilin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Presenilin 2 en células tumorales con expresión de PSEN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.