Pre-TCRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422473-ACT

O gene **Ptcra** de camundongo codifica a **cadeia alfa do receptor pré‑T** (Pre‑TCRα), um componente essencial do complexo pré‑TCR, que se associa ao **TCRβ** para formar um receptor competente para sinalização durante as fases iniciais do desenvolvimento dos timócitos. A sinalização mediada por Pre‑TCRα coordena a **β‑seleção**, a sobrevivência e a proliferação de timócitos **DN3/DN4**, integrando‑se à sinalização proximal **LCK/FYN–ZAP70/SYK**, às vias de adaptadores **LAT/SLP‑76** e aos programas downstream de **MAPK** e **NF‑κB**. Ao regular a transição para os estágios **imaturos single‑positive** e **double‑positive**, a expressão de **Ptcra** molda a formação do repertório de células T e a progressão de linhagem. A perturbação da sinalização do pré‑TCR é amplamente utilizada como modelo para estudar defeitos no desenvolvimento tímico, diferenciação linfoide aberrante e mecanismos que contribuem para a desregulação imune.

Pre-TCRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ptcra sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pre-TCRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ptcra em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ptcra, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pre-TCRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ptcra nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pre-TCRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pre-TCRα em células tumorais com expressão de Ptcra silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.