PRDM14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404426-ACT

PRDM14 (proteína 14 com dedo de zinco do domínio PR) é um regulador transcricional específico de sequência que ajuda a controlar programas de pluripotência, reprogramação epigenética e a expressão de genes associados a células germinativas em células humanas. Ela influencia o estado da cromatina por meio da modulação de marcas de histonas e da dinâmica de metilação do DNA, coordenando redes transcricionais que governam decisões de destino celular e diferenciação. A atividade de PRDM14 interage com vias que mantêm estados transcricionais do tipo-tronco e regulam o comprometimento de linhagem, tornando-a relevante para estudos de biologia do desenvolvimento e reprogramação celular. A expressão desregulada de PRDM14 tem sido associada a alterações nos circuitos transcricionais e a desequilíbrio epigenético observados em múltiplos contextos de câncer, sustentando sua investigação como um nó em programas oncogênicos associados à “stemness”.

PRDM14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDM14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRDM14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDM14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDM14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRDM14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDM14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRDM14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRDM14 em células tumorais com expressão de PRDM14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.