PRAT4A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404775-ACT

CNPY3 codifica PRAT4A, uma chaperona localizada no retículo endoplasmático que auxilia a maturação e o tráfego de receptores do tipo Toll, incluindo o TLR4, ao facilitar o dobramento e a montagem corretos durante a biossíntese. Ao regular a disponibilidade de receptores na superfície celular, a PRAT4A ajuda a moldar o reconhecimento imune inato e a sinalização subsequente por meio de programas transcricionais dependentes de NF-κB e de IRFs. Alterações na função de PRAT4A podem perturbar as respostas de citocinas inflamatórias e as interações hospedeiro–microrganismo, tornando CNPY3 relevante para estudos de desregulação imune e mecanismos de doença associados à inflamação. Em sistemas celulares humanos, a PRAT4A é frequentemente investigada no contexto do controle de qualidade do RE, da biogênese de receptores e da dinâmica de sinalização de receptores de reconhecimento de padrões.

PRAT4A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNPY3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRAT4A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNPY3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNPY3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRAT4A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNPY3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRAT4A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRAT4A em células tumorais com expressão de CNPY3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.